从噬菌体随机肽库中筛选SARS病毒N蛋白表位模拟肽的研究

目的获得具有生物学活性的SARSN蛋白的模拟肽。方法以抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体作为固相筛选分子,免疫筛选噬菌体随机十二肽库,并采用夹心ELISA、竞争抑制试验鉴定阳性克隆。结果经噬菌体富集后,从随机筛选的各46个克隆中得到N蛋白的2个不同表位,即由ELISA鉴定出单克隆抗体C00835个阳性克隆,确定氨基酸序列GXLXTPXXXXGT为SARSN蛋白的一个表位;单克隆抗体C03941个阳性克隆,确定氨基酸序列TTLPXXXXAXXX为SARS病毒N蛋白的另一个表位。结论用噬菌体随机12肽库成功筛选得到SARSN蛋白的2个不同模拟表位,为用SARS表位去探索其病毒的结构及疫苗的研制创造了条件。     

黑胸大蠊若虫免疫兔血清对美洲大蠊若虫cDNA表达文库的筛选及克隆分析

目的从美洲大蠊若虫cDNA文库中筛选黑胸大蠊抗原相关基因,以期获得黑胸大蠊有潜在药用价值的蛋白质、多肽成分。方法用黑胸大蠊若虫免疫兔血清筛选美洲大蠊若虫cDNA文库,对阳性克隆进行PCR鉴定和序列测定,通过国际互联网进行核苷酸序列的同源性分析及编码蛋白质的结构分析和功能预测。结果经三轮复筛,从多个持续阳性克隆中挑选出3个进行测序、分析,其中N1克隆为新基因,Score<50,命名为Parcxpwnx01,GenBank登录号为AY838802。该基因编码231个氨基酸,初步预测该蛋白可能为一具信号转导功能的跨膜蛋白。N2克隆与美洲大蠊核蛋白体16SRNA基因高度同源,N3与黑胸大蠊线粒体DNA高度同源。结论免疫筛选获得与黑胸大蠊若虫抗原相关的基因克隆,其编码的蛋白结构和功能有待进一步研究。     

旋毛虫成虫部分cDNA表达质粒文库的构建

目的为寻找更多有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子,构建旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。方法以旋毛虫成虫cDNA文库为模板,进行PCR扩增。扩增产物500~2 000 bp之间的DNA片段用BamHⅠ、HindⅢ酶切,将酶切产物克隆入真核表达载体pcDNA3.1,对部分转化子进行酶切鉴定。结果构建了插入片段在500~1 500 bp之间的旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库,90%以上的转化子都含有插入的DNA片段。结论成功构建一个旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。     

人源日本血吸虫Fab抗体库的构建及抗独特型抗体的筛选、鉴定

目的:构建人源日本血吸虫Fab抗体库,筛选出日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:以3名晚期血吸虫患者切除的脾脏为源,构建人源日本血吸虫Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了人源日本血吸虫Fab抗体库,库容为4.3×106,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过5轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取60个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(A3、B6、C4、C17),其中B6经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了人源日本血吸虫Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体B6,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。     

应用噬菌体随机肽库筛选结肠癌患者血清中的肿瘤标记物的研究

目的用噬菌体随机呔库技术对结肠癌病人血清进行差异性筛选。以获得特异性的肿瘤标志物。方法用噬菌体随机十二肽库与结肠癌病人血清和正常人血清进行淘选．经过几轮吸附和洗脱得到重组噬菌体库。采用ELISA方法进行单克隆鉴定。挑选20个阳性范隆测序获得相同的序列：19B（GSMSRYVRWYIP）。人工合成小肽19B的寡核苷酸序列，并将其与原核表达载体PGEX-4T—I连接。转化大肠杆菌BI-21（DF3），诱导融合蛋白的表达。以Glutathione Sepharose 4B进行纯化。结果用纯化的蛋白包被抗原板检测24例正常人血清和24例结肠癌病人的血清．证实小肽在正常人血清和结肠癌病人血清间存在差异。结论小肽19B有可能作为检测结肠癌的生物标志物。     

重庆市三峡水库开县消落区居民营养知识、态度、行为调查

目的:了解重庆市三峡水库消落区居民营养知识、态度、行为的情况及相关影响因素,为今后针对消落区居民进行的营养健康教育提供参考依据。方法:用整群抽样的方法对开县消落区102户的居民(农村50户,城镇52户)进行入户问卷调查。结果:大多数开县消落区居民对铁、疾病(如糖尿病、高血压等)相关营养以及食物营养价值的知识较贫乏;营养知识的掌握程度与居民的文化程度、体质指数有关。而饮食与疾病关系、花钱预防疾病以及食物价格与营养价值关系的认知态度不是很理想;营养知识越多、居民地在城镇、家人有慢性病患者、Engel指数越低则居民营养态度越好。在行为上,消落区居民饮食一般比较咸,经常吃腌腊肉、咸菜,淘米次数比较多,仅有77·5%的居民平时关注营养宣传;营养知识越多、初中以上文化程度的居民对营养行为趋于科学合理。结论:开县消落区居民亟需营养健康教育,并可以通过营养知识—态度—行为模式对居民发挥作用,以增加科学营养知识,增强健康营养意识,优化膳食结构和养成科学合理的饮食行为习惯。     

抑制性消减杂交构建乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失40个氨基酸cDNA文库

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白羧基端缺失40个氨基酸(HBx3'-40)反式激活基因,克隆其反式激活的相关靶基因.方法:以HBx3'-40蛋白表达质粒pcDNA3(-)-HBx3'-40 转染Huh-7细胞,以转染pcDNA3(-)-HBx为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取总RNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与pUCm-T载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌JM109进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建了HBx3'-40反式激活基因差异表达的cDNA文库,文库扩增后得到154个白色克隆,经菌落PCR分析,克隆包含有200～800 bp的插入片段,部分片段编码蛋白涉及原癌基因、信号转导相关基因、细胞生长因子相关基因、细胞凋亡、代谢和蛋白合成等相关基因.结论:应用抑制性消减杂交技术成功构建了HBx和HBx3'-40差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HBx3'-40在HBV感染相关的肝细胞癌发生中的分子生物学机制提供理论依据.     

双机容错技术在图书馆网络中的应用研究

介绍了双机容错技术的原理及其在图书馆中的应用，详细说明了双机互备援模式和双机热备份模式的双机客错模式及图书馆中常采用的系统数据镜像技术和共享磁盘技术这两种双机容错方案。     

肺癌转移相关基因的差减文库的构建

目的发现与肺癌转移相关的基因.方法选择4例转移和5例非转移患者肺癌的RNA混合样品进行差减杂交.经过两步骤的杂交后,构建了转移相关基因的差减文库.对获得阳性克隆进行测序和同源性分析.结果一共获得了225个阳性克隆.在GenBank中序列比对的结果表明,它们分属124个基因.其中25个基因出现的频率大于一次,并有9个序列未找到同源基因.结论该结果将有助于各类肿瘤转移相关基因的研究.     

新疆甘草DNA片段的克隆、序列分析及其基因组DNA文库的构建

目的克隆新疆甘草DNA片段 ,构建新疆甘草基因组DNA文库。方法对新疆产 4种甘草进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析 ,回收甘草随机引物s12 1的PCR产物中 5 0 0bp左右的带 ,克隆到pMD18 T载体中 ,经电泳鉴定后测定序列 ,进行序列分析。用Sau3AI对所提新疆甘草基因组DNA进行酶切 ,回收 15～ 2 3kb之间的酶切产物片段 ,然后与LambdavectorBamHIArms进行连接、包装形成文库 ,计算文库重组噬菌体滴度、包装效率。结果获得了甘草 4 90bp的DNA片段 ,所建文库的重组噬菌体滴度为 3× 10 6pfu/ml、包装效率为 6× 10 6重组子 /μg载体DNA。结论成功克隆了新疆甘草DNA片段 ,并构建了基因组DNA文库 ,为进一步研究奠定了基础。